中文名稱：豚鼠外周血血小板分離液試劑盒
中文別名：豚鼠外周血血小板分離液試劑盒
中文別名：豚鼠外周血血小板分離液試劑盒
產(chǎn)品類別：血小板的分離
產(chǎn)品編號：PLA2011G
產(chǎn)品名稱：豚鼠外周血血小板分離液試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格：200ml/KIT
產(chǎn)品價格：￥500.00元
本品用于分離豚鼠外周血血小板
“XXXX”動物外周血血小板分離液實驗方法
技術文檔編號：TBD0049SOP
【產(chǎn)品規(guī)格】
200ml/Kit
【產(chǎn)品組成】
為方便廣大用戶使用，試劑內容如下：
【實驗前準備】
適用儀器：最大離心力可達 1200g 的水平轉子離心機
【檢驗方法】
全過程樣本、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進行。
方法一：
1. 在 15ml 離心管中，先加入 4ml 分離液，再將分離液與樣本稀釋液 8：2 混合的液體 1ml
產(chǎn)品編號：PLA2011G
產(chǎn)品名稱：豚鼠外周血血小板分離液試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格：200ml/KIT
產(chǎn)品價格：￥500.00元
本品用于分離豚鼠外周血血小板
“XXXX”動物外周血血小板分離液實驗方法
技術文檔編號：TBD0049SOP
【產(chǎn)品規(guī)格】
200ml/Kit
【產(chǎn)品組成】
為方便廣大用戶使用，試劑內容如下：
| 名稱 | 產(chǎn)品編號 | 規(guī)格 | |
| A | XXXX 動物外周血血小板分離液 | 200ml | |
| B | 樣本稀釋液（贈品） | 2010C1119 | 200ml |
| C | 清洗液（贈品） | 2010X1118 | 200ml |
| D | 說明書 | 1 份 | |
【實驗前準備】
適用儀器：最大離心力可達 1200g 的水平轉子離心機
【檢驗方法】
全過程樣本、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進行。
方法一：
- 在 15ml 離心管中，首先取抗凝血加于分離液之液面上（抗凝血與分離液最佳比例 1：2）， 250-300g ，離心 15min（注：根據(jù)血液樣本量確定離心條件，血液樣本量越多，離心力越大，離心時間越長，具體離心條件需客戶自行摸索，以達到最佳分離效果）。
- 離心后，此時離心管中由上至下分為四層。第一層為血小板血漿層。第二層為環(huán)狀乳白色細胞層。第三層為透明分離液層。第四層為紅細胞層。
- 用吸管小心吸取第一層血小板血漿層到另一 15ml 離心管中，往所得離心管中加入同體積樣本稀釋液（產(chǎn)品編號：2010C1119），混勻血小板（如需獲得的富集血小板血漿則不需加入稀釋液，直接取血漿層即得）。
- 500g，離心 20min，離心后棄上清。
- 向含有血小板沉淀的離心管中加入 10ml 清洗液（產(chǎn)品編號：2010X1118）混勻，離心450g，15min，棄上清后以 0.5ml 后續(xù)實驗所需相應液體重懸目的細胞。
1. 在 15ml 離心管中，先加入 4ml 分離液，再將分離液與樣本稀釋液 8：2 混合的液體 1ml
小心疊加于分離液之液面上形成梯度界面。
【注意事項】
【儲存條件及有效期】
常溫保存，有效期 2 年。本品易感染細菌，需無菌條件操作。無菌條件下操作，啟
封后置常溫保存。如 4℃保存，本分離液易出現(xiàn)白色結晶，影響分離效果。
【參考值（參考范圍）】
本實驗血小板提取率大于 80%。
下表為成年人外周血中各種細胞的數(shù)量及比例，用戶可適當進行參考。
- 將抗凝血液樣本 2-3ml 小心加于分離液之液面上，400g，離心 20min。
- 離心后，環(huán)狀血小板層存在于血漿層中，取血小板層或血漿層（血小板層不明顯時）于另一 15ml 離心管中。
- 后續(xù)試驗同方法一中的步驟 5。
【注意事項】
- 全過程樣本、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進行。為獲得最佳的實驗結果，最好在取血 2h 內進行實驗，血液存放時間越長，細胞分離效果越差。血液放置超過 6h 后分離效果更差甚至不能達到分離目的。
- 本實驗最好不使用高聚合材質（如聚苯乙烯）的塑料制品，應使用無靜電、低靜電離心管及未經(jīng)堿處理過后的玻璃制品，因為靜電作用將導致細胞貼壁、堿處理的玻璃表面會變成毛面，影響細胞分離效果。
- 吸取過多的血小板血漿層下層溶液會導致交界處單個核細胞混雜。
- 分離液用量大于血液樣本時，分離效果更佳。
- 如實驗后細胞得率或活性過低，請聯(lián)系技術支持以尋求幫助。
【儲存條件及有效期】
常溫保存，有效期 2 年。本品易感染細菌，需無菌條件操作。無菌條件下操作，啟
封后置常溫保存。如 4℃保存，本分離液易出現(xiàn)白色結晶，影響分離效果。
【參考值（參考范圍）】
本實驗血小板提取率大于 80%。
下表為成年人外周血中各種細胞的數(shù)量及比例，用戶可適當進行參考。
| 紅細胞 | 白細胞 | 血小板 | |||||
| （4.0-10.0）×109 | |||||||
| 含量（個/L） | （4.0-5.5）×1012 | 中性粒細胞 | 淋巴細胞 | 單核細胞 | （1.0-3.0）×1011 | ||
| 50%-70% | 20%-40% | 3%-8% | |||||
| 【相關實驗技術方案】 | |||||||
| 1. | 所獲得血小板的酸提取技術。 | ||||||
| 2. | 所獲得目的細胞的鑒定方法 | ||||||
| A.流式細胞技術 | |||||||
B.免疫組化技術
C.原位雜交技術
D.PCR 技術
【可能存在的問題及解決方法】
1. 由于血液粘度、細胞密度等差異可能造成的問題及解決方案如下表所示：
| 出現(xiàn)情況 | 出現(xiàn)原因 | 建議解決方案 |
| 離心后目的細胞存在于血漿層或稀釋液層 | 轉速過小或離心時間過短 | 適當增減轉速 |
| 離心后目的細胞存在于分離液中 | 轉速過大或離心時間過長 | |
| 離心后白環(huán)層彌散 | 細胞密度過大 | 調整細胞密度 |
| 離心后白環(huán)層太淺或看不見 | 細胞密度過小 | |
- 本分離液分離細胞的原理為密度梯度離心，其密度與溫度、大氣壓等密切相關。不同地區(qū)客戶可根據(jù)當?shù)厍闆r對離心條件進行適當調整。建議對離心條件進行調整時，恒定離心時間，對離心轉速進行調整。
- 本分離液依照國際標準，全部使用藥用級原料，性能指標與國產(chǎn)同類產(chǎn)品略有不同，可能出現(xiàn)紅細胞沉降不完全的情況，可以適當加大離心轉速。
注：在對離心條件進行調整時，離心轉速的加減以 50-100g 為基數(shù)，直至達到最佳分離效果，
離心力最小不得小于 400g，最大不得大于 1200g。離心時間以 20-30min為準。
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