中文名稱：大鼠腫瘤組織淋巴、單核巨噬、粒細胞分離液試劑盒
中文別名：大鼠腫瘤組織淋巴、單核巨噬、粒細胞分離液試劑盒
中文別名：大鼠腫瘤組織淋巴、單核巨噬、粒細胞分離液試劑盒
產品類別：腫瘤細胞的分離
產品編號：LP2014RAT
產品名稱：大鼠腫瘤組織淋巴、單核巨噬、粒細胞分離液試劑盒
產品規格：3X200ml/Kit
產品價格：￥1200元
“XXXX”動物腫瘤組織淋巴細胞、單核巨噬、粒細胞
分離液實驗方法
技術文檔編號：TBD0052SOP
【產品規格】
3×200ml/Kit
【產品組成】
為方便廣大用戶使用，試劑內容如下：
【實驗前準備】
適用儀器：最大離心力可達 1200g 的水平轉子離心機
【檢驗方法】
全過程樣本、試劑及實驗環境均需在 20±2℃的條件下進行。
紅細胞，具體操作說明詳見“紅細胞裂解液使用說明”）到 15ml 離心管中，往所得離心
產品編號：LP2014RAT
產品名稱：大鼠腫瘤組織淋巴、單核巨噬、粒細胞分離液試劑盒
產品規格：3X200ml/Kit
產品價格：￥1200元
“XXXX”動物腫瘤組織淋巴細胞、單核巨噬、粒細胞
分離液實驗方法
技術文檔編號：TBD0052SOP
【產品規格】
3×200ml/Kit
【產品組成】
為方便廣大用戶使用，試劑內容如下：
| 名稱 | 產品編號 | 規格 | |
| A | 分離液 1 | 200ml | |
| B | 分離液 2 | 200ml | |
| C | 分離液 3 | 200ml | |
| D | 試劑 F（贈品） | F2013TBD | 200ml |
| E | 樣本稀釋液（贈品） | 2010C1119 | 200ml |
| F | 清洗液（贈品） | 2010X1118 | 200ml |
| G | 說明書 | 1 份 | |
【實驗前準備】
適用儀器：最大離心力可達 1200g 的水平轉子離心機
【檢驗方法】
全過程樣本、試劑及實驗環境均需在 20±2℃的條件下進行。
- 首先制備組織單細胞懸液，制備方法詳見“組織單細胞懸液制備技術”。取一支適當的離心管，依次小心加入分離液 1、分離液 2、分離液 3（體積比為 3:2:1，體積總量與組織單細胞懸液體積相等），制成梯度界面，各液面分層一定要清晰。（如組織單細胞懸液樣本量為 6ml，則加入分離液 1：3ml、分離液 2：2ml、分離液 3：1ml。）
- 用吸管小心吸取組織懸液樣本加于分離液液面上，400-500g，離心 20-30min（注：根據組織懸液樣本量確定離心條件，樣本量越多，離心力越大，離心時間越長，最大離心力可達 1200g，具體離心條件需客戶自行摸索，以達到最佳分離效果）。
- 離心后，此時離心管中將出現兩層環狀乳白色細胞層。
- 用吸管吸取兩層環狀目的細胞層（如有紅細胞混雜則需用紅細胞裂解液（需另購）裂解
紅細胞，具體操作說明詳見“紅細胞裂解液使用說明”）到 15ml 離心管中，往所得離心
管中加入 10ml 清洗液（產品編號：2010X1118），混勻細胞。
【注意事項】
【儲存條件及有效期】
常溫保存，有效期 2 年。本品易感染細菌，需無菌條件操作。無菌條件下操作，啟
封后置常溫保存。
【參考值（參考范圍）】
本實驗腫瘤組織淋巴細胞、單核巨噬、粒細胞提取率大于 80%。
下表為成年人外周血中各種細胞的數量及比例，用戶可適當進行參考。
- 250g，離心 10min。
- 棄上清。
- 用吸管以 5ml 清洗液（產品編號：2010X1118）重懸所得細胞。
- 250g，離心 10min。
- 重復 6、7、8，棄上清后以 0.5ml 后續實驗所需相應液體重懸細胞。
【注意事項】
- 全過程樣本、試劑及實驗環境均需在 20±2℃的條件下進行。為獲得最佳的實驗結果，最好在取樣 2h 內進行實驗，樣品存放時間越長，細胞分離效果越差。樣品放置超過 6h 后分離效果更差甚至不能達到分離目的。
- 本實驗最好不要使用高聚合材質（如聚苯乙烯）的塑料制品，應使用無靜電、低靜電離心管及未經堿處理過后的玻璃制品，因為靜電作用將導致細胞貼壁、堿處理的玻璃表面會變成毛面，影響細胞分離效果。
- 如所實驗后細胞得率或活性過低，請聯系技術支持以尋求幫助。
【儲存條件及有效期】
常溫保存，有效期 2 年。本品易感染細菌，需無菌條件操作。無菌條件下操作，啟
封后置常溫保存。
【參考值（參考范圍）】
本實驗腫瘤組織淋巴細胞、單核巨噬、粒細胞提取率大于 80%。
下表為成年人外周血中各種細胞的數量及比例，用戶可適當進行參考。
| 紅細胞 | 白細胞 | 血小板 | |||
| （4.0-10.0）×109 | |||||
| 含量（個/L） | （4.0-5.5）×1012 | 中性粒細胞 | 淋巴細胞 | 單核細胞 | （1.0-3.0）×1011 |
| 50%-70% | 20%-40% | 3%-8% | |||
| 【相關實驗技術方案】 | |||||
- 組織單細胞懸液制備技術。
- 所獲得腫瘤組織淋巴細胞、單核巨噬、粒細胞的培養技術。
- 所獲得腫瘤組織淋巴細胞、單核巨噬、粒細胞的核酸提取技術。
- 所獲得腫瘤組織淋巴細胞、單核巨噬、粒細胞的鑒定方法
A.流式細胞技術
B.免疫組化技術
C.原位雜交技術
D.PCR 技術
【可能存在的問題及解決方法】
1. 由于血液粘度、細胞密度等差異可能造成的問題及解決方案如下表所示：
| 出現情況 | 出現原因 | 建議解決方案 |
| 離心后目的細胞存在于血漿層或稀釋液層 | 轉速過小或離心時間過短 | 適當增減轉速 |
| 離心后目的細胞存在于分離液中 | 轉速過大或離心時間過長 | |
| 離心后白環層彌散 | 細胞密度過大 | 調整細胞密度 |
| 離心后白環層太淺或看不見 | 細胞密度過小 | |
- 本分離液分離細胞的原理為密度梯度離心，其密度與溫度、大氣壓等密切相關。不同地區客戶可根據當地情況對離心條件進行適當調整。建議對離心條件進行調整時，恒定離心時間，對離心轉速進行調整。
- 本分離液依照國際標準，全部使用藥用級原料，性能指標與國產同類產品略有不同，可能出現紅細胞沉降不完全的情況，可以適當加大離心轉速。
注：在對離心條件進行調整時，離心轉速的加減以 50-100g 為基數，直至達到最佳分離效果，
離心力最小不得小于 400g，最大不得大于 1200g。離心時間以 20-30min 為準。
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