中文名稱：虎外周血白細(xì)胞分離液試劑盒（分子生物學(xué)及細(xì)胞培養(yǎng)專用）
中文別名：虎外周血白細(xì)胞分離液試劑盒（分子生物學(xué)及細(xì)胞培養(yǎng)專用）
中文別名：虎外周血白細(xì)胞分離液試劑盒（分子生物學(xué)及細(xì)胞培養(yǎng)專用）
產(chǎn)品類別：外周血白細(xì)胞的分離
產(chǎn)品編號(hào)：WBC1097
產(chǎn)品名稱：虎外周血白細(xì)胞分離液試劑盒（分子生物學(xué)及細(xì)胞培養(yǎng)專用）
產(chǎn)品規(guī)格：200ml/KIT
產(chǎn)品價(jià)格：￥1050元
本品用于分離虎外周血白細(xì)胞
“XXXX”動(dòng)物外周血白細(xì)胞分離液實(shí)驗(yàn)方法
（細(xì)胞培養(yǎng)及分子生物學(xué)專用）
技術(shù)文檔編號(hào)：TBD0031SOP
【產(chǎn)品規(guī)格】
200ml/Kit
【產(chǎn)品組成】
為方便廣大用戶使用，試劑內(nèi)容如下：
| 名稱 | 產(chǎn)品編號(hào) | 規(guī)格 | |
| A | XXXX 動(dòng)物外周血白細(xì)胞分離液 | 200ml | |
| B | 樣本稀釋液（贈(zèng)品） | 2010C1119 | 200ml |
| C | 清洗液（贈(zèng)品） | 2010X1118 | 200ml |
| D | 紅細(xì)胞裂解液（贈(zèng)品） | NH4CL2009 | 100ml |
| E | 說明書 | 1 份 | |
【實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備】
適用儀器：最大離心力可達(dá) 1200g 的水平轉(zhuǎn)子離心機(jī)
【檢驗(yàn)方法】
全過程樣本、試劑及實(shí)驗(yàn)環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行。
首先取抗凝血，根據(jù)樣本量大小，分以下兩種情況：
情況 A：血液樣本量小于 5ml 時(shí)，實(shí)驗(yàn)方法如下：
- 取一支 15ml 離心管，先加入 5ml 分離液
- 用吸管小心吸取血液樣本加于分離液液面上，500-800g，離心 20-30min（注：如改變血液樣本及分離液用量，需相應(yīng)調(diào)整離心力及離心時(shí)間，具體離心條件需客戶自行摸索，以達(dá)到最佳分離效果。）
- 離心后用吸管小心吸取所有環(huán)狀乳白色細(xì)胞層（一層或兩層），加入 10 ml 清洗液（產(chǎn)品編號(hào)：2010X1118），混勻細(xì)胞。250g，離心 10min。重復(fù)洗滌 2-3 次，即得所需白細(xì)胞。
- 如有紅細(xì)胞殘留請(qǐng)使用紅細(xì)胞裂解液（產(chǎn)品編號(hào)：NH4CL2009）裂解紅細(xì)胞，具體操
作方法詳見“紅細(xì)胞裂解液使用說明”。
情況 B：血液樣本量大于等于 5ml 時(shí)，實(shí)驗(yàn)方法如下：
- 取一支適當(dāng)?shù)碾x心管，先加入與樣本等量的分離液。
- 將血液樣本小心加于分離液之液面上，550-850g（最大離心力可至 1000g），離心20-30min。（注：根據(jù)血液樣本量確定離心條件，血液量越多，離心力越大，離心時(shí)間越長(zhǎng)，具體離心條件需客戶自行摸索，以達(dá)到最佳分離效果。加入血液樣本后，樣本及分離液總體積不得超過離心管總體積的三分之二）。
- 剩余步驟同“情況 A”中步驟 3 與步驟 4。
【注意事項(xiàng)】
- 全過程樣本、試劑及實(shí)驗(yàn)環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行。為獲得最佳的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，最好在取血 2h 內(nèi)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，血液存放時(shí)間越長(zhǎng)，細(xì)胞分離效果越差。血液放置超過 6h 后分離效果更差甚至不能達(dá)到分離目的。
- 本實(shí)驗(yàn)最好不要使用高聚合材質(zhì)（如聚苯乙烯）的塑料制品，應(yīng)使用無靜電、低靜電離心管及未經(jīng)堿處理過后的玻璃制品，因?yàn)殪o電作用將導(dǎo)致細(xì)胞貼壁、堿處理的玻璃表面會(huì)變成毛面，影響細(xì)胞分離效果。
- 分離液用量大于稀釋后血液樣本時(shí)，分離效果更佳。
- 當(dāng)血液樣本粘度過高需稀釋時(shí)，最優(yōu)稀釋方法：將血液與樣本稀釋液（產(chǎn)品編號(hào)：2010C1119）1:1 稀釋混勻備用。注：不當(dāng)?shù)南♂尫椒〞?huì)降低細(xì)胞得率及活性。如血液樣本經(jīng)過稀釋則分離過程中需適當(dāng)降低離心力和離心時(shí)間。
- 如實(shí)驗(yàn)后細(xì)胞得率或活性過低，請(qǐng)聯(lián)系技術(shù)支持以尋求幫助。
【儲(chǔ)存條件及有效期】
常溫保存，有效期 2 年。本品易感染細(xì)菌，需無菌條件操作。無菌條件下操作，啟
封后置常溫保存。如 4℃保存，本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶，影響分離效果。
【參考值（參考范圍）】
本實(shí)驗(yàn)白細(xì)胞提取率及純度大于 80%。
下表為成年人外周血中各種細(xì)胞的數(shù)量及比例，用戶可適當(dāng)進(jìn)行參考。
| 紅細(xì)胞 | 白細(xì)胞 | 血小板 | |||
| （4.0-10.0）×109 | |||||
| 含量（個(gè)/L） | （4.0-5.5）×1012 | 中性粒細(xì)胞 | 淋巴細(xì)胞 | 單核細(xì)胞 | （1.0-3.0）×1011 |
| 50%-70% | 20%-40% | 3%-8% | |||
【相關(guān)實(shí)驗(yàn)技術(shù)方案】
- 所獲得白細(xì)胞的培養(yǎng)技術(shù)。
- 所獲得白細(xì)胞的核酸提取技術(shù)。
- 所獲得白細(xì)胞的鑒定方法A.流式細(xì)胞技術(shù)B.免疫組化技術(shù)
D.PCR 技術(shù)
【可能存在的問題及解決方法】
1. 由于血液粘度、細(xì)胞密度等差異可能造成的問題及解決方案如下表所示：
| 出現(xiàn)情況 | 出現(xiàn)原因 | 建議解決方案 |
| 離心后目的細(xì)胞存在于血漿層或稀釋液層 | 轉(zhuǎn)速過小或離心時(shí)間過短 | 適當(dāng)增減轉(zhuǎn)速 |
| 離心后目的細(xì)胞存在于分離液中 | 轉(zhuǎn)速過大或離心時(shí)間過長(zhǎng) | |
| 離心后白環(huán)層彌散 | 細(xì)胞密度過大 | 調(diào)整細(xì)胞密度 |
| 離心后白環(huán)層太淺或看不見 | 細(xì)胞密度過小 | |
- 本分離液分離細(xì)胞的原理為密度梯度離心，其密度與溫度、大氣壓等密切相關(guān)。不同地區(qū)客戶可根據(jù)當(dāng)?shù)厍闆r對(duì)離心條件進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。建議對(duì)離心條件進(jìn)行調(diào)整時(shí)，恒定離心時(shí)間，對(duì)離心轉(zhuǎn)速進(jìn)行調(diào)整。
- 本分離液依照國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)，全部使用藥用級(jí)原料，性能指標(biāo)與國(guó)產(chǎn)同類產(chǎn)品略有不同，可能出現(xiàn)紅細(xì)胞沉降不完全的情況，可以適當(dāng)加大離心轉(zhuǎn)速。
注：在對(duì)離心條件進(jìn)行調(diào)整時(shí)，離心轉(zhuǎn)速的加減以 50-100g 為基數(shù)，直至達(dá)到最佳分離效果，
離心力最小不得小于 400g，最大不得大于 1200g。離心時(shí)間以 20-30min 為準(zhǔn)。
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