中文名稱：人子宮內(nèi)膜組織淋巴細胞分離液KIT
中文別名：人子宮內(nèi)膜組織淋巴細胞分離液KIT
中文別名：人子宮內(nèi)膜組織淋巴細胞分離液KIT
人子宮內(nèi)膜淋巴細胞分離液實驗方法
本品用于分離人子宮內(nèi)膜組織淋巴細胞
【產(chǎn)品規(guī)格】
2×200ml/Kit
【產(chǎn)品組成】
為方便廣大用戶使用，試劑內(nèi)容如下：
| 名稱 | 產(chǎn)品編號 | 規(guī)格 | |
| A | 分離液 1 | 200ml | |
| B | 分離液 2 | 200ml | |
| C | 樣本稀釋液（贈品） | 2010C1119 | 200ml |
| D | 清洗液（贈品） | 2010X1118 | 200ml |
| E | F 液（贈品） | F2013TBD | 200ml |
| Ｆ | 說明書 | 1 份 | |
【實驗前準備】
適用儀器：最大離心力可達 1200g 的水平轉(zhuǎn)子離心機
【檢驗方法】
全過程樣本、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進行。
- 首先制備臟器組織單細胞懸液，制備方法詳見“組織單細胞懸液制備技術(shù)（文檔編號：
TBD0004SOP）”。
- 取一支離心管，依次小心加入分離液 1、分離液 2（體積比為 3:1，試劑總量與細胞懸液體積比為 2：1。如細胞懸液為 2ml，則先后加入分離液 1：3ml、分離液 2：1ml。試劑總量最少不低于 4ml。），制成梯度界面，各液面分層一定要清晰。
- 用吸管小心吸取細胞懸液加于分離液液面上，400-500g，離心 20-30min（注：根據(jù)樣本量確定離心條件，血液樣本量越多，離心力越大，離心時間越長，具體離心條件需客戶自行摸索，以達到最佳分離效果）。
- 離心后，此時離心管中由上至下分為六層。第一層為稀釋液層。第二層為環(huán)狀乳白色單核細胞層（第一層白環(huán)及上層 50%分離液 2）。第三層為環(huán)狀乳白色淋巴細胞層（下層50%分離液 2 及第二層白環(huán)）。第四層為透明分離液 1 液層。第五層為粒細胞層。第六層為紅細胞層。
- 用吸管小心吸取第二層到另一 15ml 離心管中，往所得離心管中加入 10ml 清洗液（產(chǎn)品
編號：2010X1118），混勻細胞。
分離圖例
【注意事項】
如實驗后細胞得率或活性過低，請聯(lián)系研謹生物支持以尋求幫助。
常溫保存，有效期 2 年。本品易感染細菌，需無菌條件操作。無菌條件下操作，啟封后置常溫保存。如 4℃保存，本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶，影響分離效果。
【參考值（參考范圍）】
- 250g，離心 10min。
- 棄上清。
- 用吸管以 5-10ml 清洗液（產(chǎn)品編號：2010X1118）重懸所得細胞。
- 250g，離心 10min。
- 重復 7、8、9，棄上清后以 0.5ml 后續(xù)實驗所需相應(yīng)液體重懸細胞。
分離圖例
【注意事項】
- 全過程樣本、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進行。為獲得最佳的實驗結(jié)果，最好在取樣 2h 內(nèi)進行實驗，樣本存放時間越長，細胞分離效果越差。樣本放置超過 6h 后分離效果更差甚至不能達到分離目的。
- 本實驗最好不使用高聚合材質(zhì)（如聚苯乙烯）的塑料制品，應(yīng)使用無靜電、低靜電離心管及未經(jīng)堿處理過后的玻璃制品，因為靜電作用將導致細胞貼壁、堿處理的玻璃表面會變成毛面，影響細胞分離效果。
- 分離液用量大于臟器組織單細胞懸液樣本量時，分離效果更佳。
如實驗后細胞得率或活性過低，請聯(lián)系研謹生物支持以尋求幫助。
常溫保存，有效期 2 年。本品易感染細菌，需無菌條件操作。無菌條件下操作，啟封后置常溫保存。如 4℃保存，本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶，影響分離效果。
【參考值（參考范圍）】
| 本實驗單核細胞提取率大于 80%。 | ||||||||
| 下表為成年人外周血中各種細胞的數(shù)量及比例，用戶可適當進行參考。 | ||||||||
| 紅細胞 | 白細胞 | 血小板 | ||||||
| （4.0-10.0）×109 | ||||||||
| 含量（個/L） | （4.0-5.5）×1012 | 中性粒細胞 | 淋巴細胞 | 單核細胞 | （1.0-3.0）×1011 | |||
| 50%-70% | 20%-40% | 3%-8% | ||||||
| 【相關(guān)實驗技術(shù)方案】 | ||||||||
- 臟器組織單細胞懸液制備技術(shù)。
- 所獲得單核細胞的培養(yǎng)技術(shù)。
- 所獲得單核細胞的核酸提取技術(shù)。
- 所獲得單核細胞的鑒定方法
A.流式細胞技術(shù) B.免疫組化技術(shù) C.原位雜交技術(shù) D.PCR 技術(shù)
【可能存在的問題及解決方法】
1. 由于血液粘度、細胞密度等差異可能造成的問題及解決方案如下表所示：
| 出現(xiàn)情況 | 出現(xiàn)原因 | 建議解決方案 |
| 離心后目的細胞存在于血漿層或稀釋液層 | 轉(zhuǎn)速過小或離心時間過短 | 適當增減轉(zhuǎn)速 |
| 離心后目的細胞存在于分離液中 | 轉(zhuǎn)速過大或離心時間過長 | |
| 離心后白環(huán)層彌散 | 細胞密度過大 | 調(diào)整細胞密度 |
| 離心后白環(huán)層太淺或看不見 | 細胞密度過小 | |
- 本分離液分離細胞的原理為密度梯度離心，其密度與溫度、大氣壓等密切相關(guān)。不同地區(qū)客戶可根據(jù)當?shù)厍闆r對離心條件進行適當調(diào)整。建議對離心條件進行調(diào)整時，恒定離心時間，對離心轉(zhuǎn)速進行調(diào)整。
- 本分離液依照國際標準，全部使用藥用級原料，性能指標與國產(chǎn)同類產(chǎn)品略有不同，可能出現(xiàn)紅細胞沉降不完全的情況，可以適當加大離心轉(zhuǎn)速。
注：在對離心條件進行調(diào)整時，離心轉(zhuǎn)速的加減以 50-100g 為基數(shù)，直至達到最佳分離效果，
離心力最小不得小于 400g，最大不得大于 1200g。離心時間以 20-30min 為準。
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