中文名稱：馬外周血中性粒細(xì)胞分離液試劑盒
中文別名：馬外周血中性粒細(xì)胞分離液試劑盒
中文別名：馬外周血中性粒細(xì)胞分離液試劑盒
“XXXX”動物外周血中性粒細(xì)胞分離液 KIT 說明書
本品用于分離馬外周血中性粒細(xì)胞
技術(shù)文檔編號：TBD0034SOP
【產(chǎn)品規(guī)格】
200ml/Kit
【產(chǎn)品組成】
為方便廣大用戶使用，試劑內(nèi)容如下：
【實驗前準(zhǔn)備】
適用儀器：最大離心力可達(dá) 1200g 的水平轉(zhuǎn)子離心機(jī)
【檢驗方法】
全過程樣本、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行。
根據(jù)樣本量大小，分以下兩種情況：
情況 A：血液樣本量小于 5ml 時，實驗方法如下：
本品用于分離馬外周血中性粒細(xì)胞
技術(shù)文檔編號：TBD0034SOP
【產(chǎn)品規(guī)格】
200ml/Kit
【產(chǎn)品組成】
為方便廣大用戶使用，試劑內(nèi)容如下：
| 名稱 | 產(chǎn)品編號 | 規(guī)格 | |
| A | 分離液 1 | 200ml | |
| B | 分離液 2 | 100ml | |
| C | 清洗液（贈品） | 2010X1118 | 200ml |
| D | 紅細(xì)胞裂解液（贈品） | NH4CL2009 | 100ml |
| E | 說明書 | 1 份 | |
【實驗前準(zhǔn)備】
適用儀器：最大離心力可達(dá) 1200g 的水平轉(zhuǎn)子離心機(jī)
【檢驗方法】
全過程樣本、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行。
根據(jù)樣本量大小，分以下兩種情況：
情況 A：血液樣本量小于 5ml 時，實驗方法如下：
- 取一支 15ml 離心管，先加入 4ml 分離液 1，后將 2ml 分離液 2 小心疊加于分離液 1 之上，形成梯度界面。
- 用吸管小心吸取血液樣本加于分離液之液面上，500-650g ，離心 20-30min（注：如改變血液樣本及分離液用量，需相應(yīng)調(diào)整離心力及離心時間，具體離心條件需客戶自行摸索，以達(dá)到最佳分離效果。）
- 離心后，離心管中將出現(xiàn)兩層環(huán)狀乳白色細(xì)胞層，上層細(xì)胞為單個核細(xì)胞層，下層細(xì)胞為中性粒細(xì)胞層。
- 用吸管小心吸取分離液中的中性粒細(xì)胞層，如有紅細(xì)胞混雜則加入適量紅細(xì)胞裂解液（產(chǎn)品編號：NH4CL2009）將紅細(xì)胞裂解（具體方法見“紅細(xì)胞裂解液使用說明”）即得目的細(xì)胞。
- 將獲得的細(xì)胞層移至另一 15ml 離心管中，向所得離心管中加入 10ml 清洗液（產(chǎn)品編號：
2010X1118），混勻細(xì)胞。
- 250g，離心 10min。
- 棄上清。
- 用吸管以 5ml 清洗液（產(chǎn)品編號：2010X1118）重懸所得細(xì)胞。
- 250g，離心 10min。
- 重復(fù) 7、8、9，棄上清后以 0.5ml 后續(xù)實驗所需相應(yīng)液體重懸細(xì)胞。
情況 B：血液樣本量大于等于 5ml 時，實驗方法如下：
- 取一支適當(dāng)?shù)碾x心管，依次小心加入分離液 1 及分離液 2（分離液 1 與分離液 2 比例 2：1）,試劑總量與稀釋后的樣本量相等。
- 將血液樣本小心加于分離液之液面上，550-750g（最大離心力可至 1000g），離心 20-30min。（注：根據(jù)血液樣本量確定離心條件，血液量越多，離心力越大，離心
時間越長，具體離心條件需客戶自行摸索，以達(dá)到最佳分離效果。加入血液樣本后，樣本及分離液總體積不得超過離心管總體積的三分之二）。
- 剩余步驟同“情況 A”中步驟 3 至步驟 10。
分離圖例
【注意事項】
- 全過程樣本、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行。為獲得最佳的實驗結(jié)果，最好在取血 2h 內(nèi)進(jìn)行實驗，血液存放時間越長，細(xì)胞分離效果越差。血液放置超過 6h 后分離效果更差甚至不能達(dá)到分離目的。
- 本實驗最好不使用高聚合材質(zhì)（如聚苯乙烯）的塑料制品，應(yīng)使用無靜電、低靜電離心
管及未經(jīng)堿處理過后的玻璃制品，因為靜電作用將導(dǎo)致細(xì)胞貼壁、堿處理的玻璃表面會
變成毛面，影響細(xì)胞分離效果。
- 分離液用量大于血液樣本時，分離效果更佳。
- 血液樣本不需稀釋，直接進(jìn)行分離即可。
- 如實驗后細(xì)胞得率或活性過低，請聯(lián)系技術(shù)支持以尋求幫助，具體聯(lián)系方式詳見下方生產(chǎn)企業(yè)信息。
【儲存條件及有效期】
常溫保存，有效期 2 年。本品易感染細(xì)菌，需無菌條件操作。無菌條件下操作，啟
封后置常溫保存。如 4℃保存，本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶，影響分離效果。
【參考值（參考范圍）】
本實驗中性粒細(xì)胞提取率大于 80%。
下表為成年人外周血中各種細(xì)胞的數(shù)量及比例，用戶可適當(dāng)進(jìn)行參考。
| 紅細(xì)胞 | 白細(xì)胞 | 血小板 | |||
| （4.0-10.0）×109 | |||||
| 含量（個/L） | （4.0-5.5）×1012 | 中性粒細(xì)胞 | 淋巴細(xì)胞 | 單核細(xì)胞 | （1.0-3.0）×1011 |
| 50%-70% | 20%-40% | 3%-8% | |||
| 【相關(guān)實驗技術(shù)方案】 | |||||
- 所獲得中性粒細(xì)胞的培養(yǎng)技術(shù)。
- 所獲得中性粒細(xì)胞的核酸提取技術(shù)。
- 所獲得中性粒細(xì)胞的鑒定方法A.流式細(xì)胞技術(shù)B.免疫組化技術(shù)C.原位雜交技術(shù)
D.PCR 技術(shù)
【可能存在的問題及解決方法】
1. 由于血液粘度、細(xì)胞密度等差異可能造成的問題及解決方案如下表所示：
| 出現(xiàn)情況 | 出現(xiàn)原因 | 建議解決方案 | |
| 離心后目的細(xì)胞存在于血漿層或稀釋液層 | 轉(zhuǎn)速過小或離心時間過短 | 適當(dāng)增減轉(zhuǎn)速 | |
| 離心后目的細(xì)胞存在于分離液中 | 轉(zhuǎn)速過大或離心時間過長 | ||
| 離心后白環(huán)層彌散 | 細(xì)胞密度過大 | 調(diào)整細(xì)胞密度 | |
| 離心后白環(huán)層太淺或看不見 | 細(xì)胞密度過小 | |
- 本分離液分離細(xì)胞的原理為密度梯度離心，其密度與溫度、大氣壓等密切相關(guān)。不同地區(qū)客戶可根據(jù)當(dāng)?shù)厍闆r對離心條件進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。建議對離心條件進(jìn)行調(diào)整時，恒定離心時間，對離心轉(zhuǎn)速進(jìn)行調(diào)整。
- 本分離液依照國際標(biāo)準(zhǔn)，全部使用藥用級原料，性能指標(biāo)與國產(chǎn)同類產(chǎn)品略有不同，可
能出現(xiàn)紅細(xì)胞沉降不完全的情況，可以適當(dāng)加大離心轉(zhuǎn)速。
注：在對離心條件進(jìn)行調(diào)整時，離心轉(zhuǎn)速的加減以 50-100g 為基數(shù)，直至達(dá)到最佳分離效果，
離心力最小不得小于 400g，最大不得大于 1200g。離心時間以 20-30min 為準(zhǔn)。
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