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虎外周血中性粒細胞分離液試劑盒
產品編號:LZS1088
別名 虎外周血中性粒細胞分離液試劑盒 
英文名  
虎外周血中性粒細胞分離液試劑盒
中文名稱:虎外周血中性粒細胞分離液試劑盒
中文別名:虎外周血中性粒細胞分離液試劑盒
XXXX”動物外周血中性粒細胞分離液 KIT 說明書
 
本品用于分離虎外周血中性粒細胞
 
技術文檔編號:TBD0034SOP
 
【產品規格】
 
200ml/Kit
 
【產品組成】
 
為方便廣大用戶使用,試劑內容如下:
 
  名稱 產品編號 規格
       
A 分離液 1   200ml
       
B 分離液 2   100ml
       
C 清洗液(贈品) 2010X1118 200ml
       
D 紅細胞裂解液(贈品) NH4CL2009 100ml
       
E 說明書   1 份
       
 
【實驗前準備】
 
適用儀器:最大離心力可達 1200g 的水平轉子離心機
 
【檢驗方法】
 
全過程樣本、試劑及實驗環境均需在 20±2℃的條件下進行。
 
根據樣本量大小,分以下兩種情況:
 
情況 A:血液樣本量小于 5ml 時,實驗方法如下:
 
  • 取一支 15ml 離心管,先加入 4ml 分離液 1,后將 2ml 分離液 2 小心疊加于分離液 1 之上,形成梯度界面。
 
  • 用吸管小心吸取血液樣本加于分離液之液面上,500-650g ,離心 20-30min(注:如改變血液樣本及分離液用量,需相應調整離心力及離心時間,具體離心條件需客戶自行摸索,以達到最佳分離效果。)
 
  • 離心后,離心管中將出現兩層環狀乳白色細胞層,上層細胞為單個核細胞層,下層細胞為中性粒細胞層。
 
  • 用吸管小心吸取分離液中的中性粒細胞層,如有紅細胞混雜則加入適量紅細胞裂解液(產品編號:NH4CL2009)將紅細胞裂解(具體方法見“紅細胞裂解液使用說明”)即得目的細胞。
 
  • 將獲得的細胞層移至另一 15ml 離心管中,向所得離心管中加入 10ml 清洗液(產品編號:
 

 
2010X1118),混勻細胞。
 
  • 250g,離心 10min。
 
  • 棄上清。
 
  • 用吸管以 5ml 清洗液(產品編號:2010X1118)重懸所得細胞。
 
  • 250g,離心 10min。
 
  • 重復 7、8、9,棄上清后以 0.5ml 后續實驗所需相應液體重懸細胞。
 
情況 B:血液樣本量大于等于 5ml 時,實驗方法如下:
 
  • 取一支適當的離心管,依次小心加入分離液 1 及分離液 2(分離液 1 與分離液 2 比例 2:1),試劑總量與稀釋后的樣本量相等。
 
  • 將血液樣本小心加于分離液之液面上,550-750g(最大離心力可至 1000g),離心 20-30min。(注:根據血液樣本量確定離心條件,血液量越多,離心力越大,離心
 
時間越長,具體離心條件需客戶自行摸索,以達到最佳分離效果。加入血液樣本后,樣本及分離液總體積不得超過離心管總體積的三分之二)。
 
  • 剩余步驟同“情況 A”中步驟 3 至步驟 10。
 
分離圖例
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
【注意事項】
 
  • 全過程樣本、試劑及實驗環境均需在 20±2℃的條件下進行。為獲得最佳的實驗結果,最好在取血 2h 內進行實驗,血液存放時間越長,細胞分離效果越差。血液放置超過 6h 后分離效果更差甚至不能達到分離目的。
 
  • 本實驗最好不使用高聚合材質(如聚苯乙烯)的塑料制品,應使用無靜電、低靜電離心
 
 
管及未經堿處理過后的玻璃制品,因為靜電作用將導致細胞貼壁、堿處理的玻璃表面會
 
變成毛面,影響細胞分離效果。
 
  • 分離液用量大于血液樣本時,分離效果更佳。
 
  • 血液樣本不需稀釋,直接進行分離即可。
 
  • 如實驗后細胞得率或活性過低,請聯系技術支持以尋求幫助,具體聯系方式詳見下方生產企業信息。
 
【儲存條件及有效期】
 
常溫保存,有效期 2 年。本品易感染細菌,需無菌條件操作。無菌條件下操作,啟
 
封后置常溫保存。如 4℃保存,本分離液易出現白色結晶,影響分離效果。
 
【參考值(參考范圍)】
 
本實驗中性粒細胞提取率大于 80%。
 
下表為成年人外周血中各種細胞的數量及比例,用戶可適當進行參考。
 
  紅細胞   白細胞   血小板
           
    (4.0-10.0)×109  
含量(個/L) (4.0-5.5)×1012 中性粒細胞 淋巴細胞 單核細胞 (1.0-3.0)×1011
    50%-70% 20%-40% 3%-8%  
           
【相關實驗技術方案】        
 
  • 所獲得中性粒細胞的培養技術。
 
  • 所獲得中性粒細胞的核酸提取技術。
 
  • 所獲得中性粒細胞的鑒定方法A.流式細胞技術B.免疫組化技術C.原位雜交技術
 
D.PCR 技術
 
【可能存在的問題及解決方法】
 
1. 由于血液粘度、細胞密度等差異可能造成的問題及解決方案如下表所示:
 
出現情況 出現原因   建議解決方案
     
離心后目的細胞存在于血漿層或稀釋液層 轉速過小或離心時間過短 適當增減轉速
     
離心后目的細胞存在于分離液中 轉速過大或離心時間過長
 
       
離心后白環層彌散 細胞密度過大   調整細胞密度
       
 
     
離心后白環層太淺或看不見 細胞密度過小  
     
 
  • 本分離液分離細胞的原理為密度梯度離心,其密度與溫度、大氣壓等密切相關。不同地區客戶可根據當地情況對離心條件進行適當調整。建議對離心條件進行調整時,恒定離心時間,對離心轉速進行調整。
 
  • 本分離液依照國際標準,全部使用藥用級原料,性能指標與國產同類產品略有不同,可
 
能出現紅細胞沉降不完全的情況,可以適當加大離心轉速。
 
注:在對離心條件進行調整時,離心轉速的加減以 50-100g 為基數,直至達到最佳分離效果,
 
離心力最小不得小于 400g,最大不得大于 1200g。離心時間以 20-30min 為準。
 
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