中文名稱：小鼠骨髓中性粒細胞分離液試劑盒
中文別名：小鼠骨髓中性粒細胞分離液試劑盒
鼠骨髓中性粒細胞分離液 KIT 說明書中文別名：小鼠骨髓中性粒細胞分離液試劑盒
本品用于分離小鼠骨髓中性粒細胞
200ml/Kit
【產品組成】
為方便廣大用戶使用，試劑內容如下：
| 名稱 | 產品編號 | 規(guī)格 | |
| A | 分離液 1 | 200ml | |
| B | 樣本稀釋液 | 2010C1119 | 200ml |
| C | 清洗液（贈品） | 2010X1118 | 200ml |
| D | 紅細胞裂解液（贈品） | NH4CL2009 | 100ml |
| E | 紅細胞沉降液（6%羥乙基淀粉） | HES-TBD550-80 | 80ml |
| F | 試劑 F | F2013TBD | 200ml |
| G | 說明書 | 1 份 | |
【實驗前準備】
適用儀器：最大離心力可達 1200g 的水平轉子離心機
【檢驗方法】
全過程樣本、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進行。
- 首先制備骨髓單細胞懸液，制備方法詳見“鼠骨髓沖洗單細胞懸液制備技術”。
- 取一支 15ml 離心管，先加入分離液 1：3ml，后加入 80%濃度分離液 1 溶液（分離液 1：
樣本稀釋液=4：1 的混合液）：1.5ml，形成梯度界面。
- 用吸管小心吸取細胞懸液樣本加于分離液之液面上，650-800g ，離心 20-30min（注：如改變樣本及分離液用量，需相應調整離心力及離心時間，具體離心條件需客戶自行摸索，以達到最佳分離效果）。
- 離心后，稀釋液層下出現(xiàn)兩層白色環(huán)狀細胞層，取下層白色環(huán)狀中性粒細胞層（會有少量紅細胞混雜），加 3-5 倍體積清洗液混勻，400g 離心 10min。
- 離心后棄上清，后可通過兩種方法去除紅細胞。
方法一：細胞沉淀用紅細胞裂解液去除紅細胞（具體方法參見“紅細胞裂解液說明書”）。
方法二：
1. 細胞沉淀用 1ml 紅細胞沉降液重懸，加于 3ml 分離液 1 之液面上，400g 離心 20min。
- 取白色環(huán)狀細胞層，加 3-5 倍體積清洗液混勻，250g 離心 10min，重復洗滌 2-3 次，獲得目的細胞（如仍有少量紅細胞混雜，使用紅細胞裂解液去除紅細胞）。
分離圖例
【注意事項】
- 全過程樣本、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進行。為獲得最佳的實驗結果，需在取樣 2h 內進行實驗。
- 本實驗最好不使用高聚合材質（如聚苯乙烯）的塑料制品，應使用無靜電、低靜電離心管及未經堿處理過后的玻璃制品，因為靜電作用將導致細胞貼壁、堿處理的玻璃表面會變成毛面，影響細胞分離效果。
- 分離液用量大于骨髓單細胞懸液樣本量時，分離效果更佳。
- 如實驗后細胞得率或活性過低，請聯(lián)系技術支持以尋求幫助.
- 請勿使用具有紅細胞保護成分的抗凝劑，否則影響分離效果（離心后，紅細胞不能完全沉至離心管底部）。
【儲存條件及有效期】
常溫保存，有效期 2 年。本品易感染細菌，需無菌條件操作。無菌條件下操作，啟封后置常溫保存。如 4℃保存，本分離液易出現(xiàn)白色結晶，影響分離效果。
【參考值（參考范圍）】
本實驗中性粒細胞提取率大于 80%。
【相關實驗技術方案】
- 骨髓沖洗單細胞懸液制備技術。
- 所獲得中性粒細胞的培養(yǎng)技術。
- 所獲得中性粒細胞的核酸提取技術。
- 所獲得中性粒細胞的鑒定方法A.流式細胞技術B.免疫組化技術
C.原位雜交技術
D.PCR 技術
【可能存在的問題及解決方法】
1. 由于血液粘度、細胞密度等差異可能造成的問題及解決方案如下表所示：
| 出現(xiàn)情況 | 出現(xiàn)原因 | 建議解決方案 |
| 離心后目的細胞存在于血漿層或稀釋液層 | 轉速過小或離心時間過短 | 適當增減轉速 |
| 離心后目的細胞存在于分離液中 | 轉速過大或離心時間過長 | |
| 離心后白環(huán)層彌散 | 細胞密度過大 | 調整細胞密度 |
| 離心后白環(huán)層太淺或看不見 | 細胞密度過小 | |
- 本分離液分離細胞的原理為密度梯度離心，其密度與溫度、大氣壓等密切相關。不同地區(qū)客戶可根據當?shù)厍闆r對離心條件進行適當調整。建議對離心條件進行調整時，恒定離心時間，對離心轉速進行調整。
- 本分離液依照國際標準，全部使用藥用級原料，性能指標與國產同類產品略有不同，可能出現(xiàn)紅細胞沉降不完全的情況，可以適當加大離心轉速。
注：在對離心條件進行調整時，離心轉速的加減以 50-100g 為基數(shù)，直至達到最佳分離效果，
離心力最小不得小于 400g，最大不得大于 1200g。離心時間以 20-30min 為準。
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